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elisa試劑盒(競(jìng)爭(zhēng)法)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2024-12-13 [474]

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    根據(jù)以上敘述可以看出,在這種方法中陰性對(duì)照和陽性對(duì)照也起到試驗(yàn)的質(zhì)控作用,試劑變質(zhì)和操作不當(dāng)均會(huì)產(chǎn)生"試驗(yàn)無效"的后果。b.標(biāo)本/陰性對(duì)照比值在實(shí)驗(yàn)條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下,elisa試劑盒這種判斷法較為合適。在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的A值后,計(jì)算S/N值。也有寫作P/N的,這里的P不代表陽性(positive),而是病人(patient)的縮寫,不應(yīng)誤解。為避免混淆,更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中,有些作者定出S/N為陽性標(biāo)準(zhǔn),現(xiàn)多為各種測(cè)定所沿用。實(shí)際上每一測(cè)定系統(tǒng)應(yīng)該用實(shí)驗(yàn)求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)注意的是,N所代表的陰性對(duì)照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對(duì)照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液,以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因此,這類試劑盒,如N<0.05(或其他數(shù)值),則按0.05計(jì)算,否則將出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

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競(jìng)爭(zhēng)法elisa試劑盒

* 在競(jìng)爭(zhēng)法elisa中, 陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競(jìng)爭(zhēng)抑制物的量,一般調(diào)節(jié)陰性對(duì)照的吸光度在1.0-1.5之間,此時(shí)反應(yīng)為敏感。

競(jìng)爭(zhēng)法ELISA不易用自視判斷結(jié)果,因肉眼很難辨別弱陽性反應(yīng)與陰性對(duì)照的顯色差異,一般均用比色計(jì)測(cè)定,讀出S、P和N的吸光值。計(jì)算方法主要也有兩種,即陽性判定值法和抑制率法。


a. 陽性判定值法

* 與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同,elisa試劑盒但在計(jì)算公式中引入陽性對(duì)照A值,現(xiàn)舉某種檢測(cè)抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對(duì)照為不含抗HBc的復(fù)鈣人血漿,陽性對(duì)照中抗HBc含量為125±100u/ml。每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽性對(duì)照和3個(gè)陰性對(duì)照。測(cè)得A值后,先計(jì)算陰性對(duì)照A值的平均值(NCX)和陽性對(duì)照A值的平均數(shù)(PCX),兩個(gè)平均數(shù)的差(N-P)必須大于一個(gè)特定的數(shù)值(例如0.300),試驗(yàn)才有效。3個(gè)陰性對(duì)照A值均應(yīng)小于2.000,而且應(yīng)≥0.5×NCX并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范圍,則棄去,而以另2個(gè)陰性對(duì)照重新計(jì)算×NCX;如有2個(gè)陰性對(duì)照A超出以上范圍,則該次實(shí)驗(yàn)無效。陽性判定值按下式計(jì)算:陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX,標(biāo)本A值≤陽性判定值的反應(yīng)為陽性,A>陽性判定值的反應(yīng)為陰性。


* 這類反應(yīng)的定性結(jié)果可以用肉眼判斷。目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性,顯色清晰者為陽性。但在elisa試劑盒中,正常人血清反應(yīng)后常可出現(xiàn)呈色的本底,此本底的深淺因試劑的組成和實(shí)驗(yàn)的條件不同而異,因此實(shí)驗(yàn)中必須加測(cè)陰性對(duì)照。陰性對(duì)照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判斷結(jié)果時(shí),更宜用顯色深于陰性對(duì)照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo)。


* 目視法簡(jiǎn)捷明了,但頗具主觀性。在條件許可下,應(yīng)該用比色計(jì)測(cè)定吸光值,這樣可以得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標(biāo)本(sample,S)、陽性對(duì)照(P)、和陰性對(duì)照(N)的吸光值,然后進(jìn)行計(jì)算。計(jì)算方法有多種,大致可分為陽性判定值法和標(biāo)本與陰性對(duì)照比值法兩類。


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